Q：培養(yǎng)基 pH 值異常

A：

? 二氧化碳分壓設(shè)置錯(cuò)誤：根據(jù)培養(yǎng)基中碳酸氫鈉的濃度而增加或降低培養(yǎng)箱中二氧化碳分壓。

? 培養(yǎng)箱無(wú)二氧化碳：定期觀察二氧化碳?jí)毫Ρ?，及時(shí)更換二氧化碳鋼瓶。

? 細(xì)胞培養(yǎng)瓶蓋擰得過(guò)緊：將蓋子旋松 1/4 圈，或換成透氣蓋培養(yǎng)瓶。

? 細(xì)菌、真菌污染 丟棄細(xì)胞和培養(yǎng)基。

? 培養(yǎng)基中的平衡鹽不匹配：二氧化碳平衡環(huán)境中使用以 Earle's 平衡鹽為基礎(chǔ)的培養(yǎng)基，大氣條件下使用以Hank's 平衡鹽為基礎(chǔ)的培養(yǎng)基。

? 碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)緩沖能力不足：加入 HEPES 緩沖液，使其終濃度為 10-25 mM。

Q：細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢

A：

? 培養(yǎng)基或血清改變：比較不同培養(yǎng)基中葡萄糖、氨基酸等成分有無(wú)差異；增加細(xì)胞接種密度；更換新鮮培養(yǎng)基。

? 必需生長(zhǎng)促進(jìn)成分 ( 如 L- 谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子 ) 缺乏、耗盡或降解使用新鮮培養(yǎng)基或向現(xiàn)有培養(yǎng)基中添加必需成分。

? 細(xì)胞初始接種密度過(guò)低：增大細(xì)胞接種密度。

? 支原體污染：檢測(cè)培養(yǎng)物有無(wú)支原體污染，如果被污染，則棄之，或用支原體清除試劑進(jìn)行清除。

? 細(xì)胞代次過(guò)高：取用新的細(xì)胞。

? 輕度細(xì)菌或真菌污染：在添加抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞，如果培養(yǎng)物被污染，則棄之。

試劑儲(chǔ)存不當(dāng)血清應(yīng)置于-5℃至 -20℃下儲(chǔ)存 ；培養(yǎng)基應(yīng)置于 2-8℃下避光儲(chǔ)存；完全培養(yǎng)基應(yīng)置于2-8℃下避光儲(chǔ)存，并限在2周內(nèi)使用。

Q：細(xì)胞死亡

A：

? 胰酶消化過(guò)度：縮短胰酶消化時(shí)間或降低消化用胰酶的工作濃度。

? 細(xì)胞狀態(tài)差：取用新的細(xì)胞。

? 支原體污染：檢測(cè)培養(yǎng)物有無(wú)支原體污染，如果被污染，則棄之，或用支原體清除試劑進(jìn)行清除。

? 培養(yǎng)基中無(wú)附著因子：如采用無(wú)血清培養(yǎng)方法，應(yīng)確保其含有附著因子，或使用包被過(guò)的培養(yǎng)器皿。

? 培養(yǎng)箱中無(wú)二氧化碳：定期觀察二氧化碳?jí)毫Ρ?，及時(shí)更換二氧化碳鋼瓶。

? 培養(yǎng)箱溫度有波動(dòng)：監(jiān)測(cè)培養(yǎng)箱內(nèi)溫度。

? 轉(zhuǎn)染試劑毒性過(guò)強(qiáng)，細(xì)胞代次過(guò)高，質(zhì)粒純度差使用低毒性的轉(zhuǎn)染試劑或在轉(zhuǎn)染后及時(shí)換液；使用低代次細(xì)胞轉(zhuǎn)染 ；使用高品質(zhì)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。

? 細(xì)胞解凍或凍存過(guò)程中損傷大：取用新的細(xì)胞。

? 培養(yǎng)基的滲透壓不正確：檢查完全培養(yǎng)基的滲透壓。大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞可耐受的滲透壓為 260-350 mOsmol/kg，昆蟲細(xì)胞可耐受的滲透壓為 340-380 mOsmol/kg。

? 培養(yǎng)基中有毒代謝產(chǎn)物蓄積過(guò)多：更換新鮮培養(yǎng)基。